DETERMINAZIONE DELLA VITALITÀ CELLULARE SU COLTURE CELLULARI UMANE IMMORTALIZZATE E/O PRIMARIE MEDIANTE TEST MTT.

La BIO-MAd offre la possibilità di effettuare saggi di vitalità cellulare attraverso il test MTT. Il test MTT (3,(4,5-dimethylthiazol-2)2,5 difeniltetrazolium bromide) è un saggio di laboratorio colorimetrico standard che consente di testare i potenziali effetti terapeutici  di sostanze (naturali e non) ed il loro potenziale citotossico all’interno delle cellule. A tale scopo le cellule vengono trattate con concentrazioni crescenti della sostanza da analizzare e al termine del trattamento, la soluzione contenente l’MTT viene aggiunta alle cellule. Gli enzimi mitocondriali riducono l’MTT a formazano, facendo virare il composto da un colore giallo ad un colore blu-violetto intenso. L’intensità della colorazione della soluzione ottenuta è direttamente proporzionale alla concentrazione di formazano ed è quindi espressione della vitalità cellulare. La densità ottica (OD) viene misurata attraverso l’uso di uno spettrofotometro ad una lunghezza d’onda pari a 570 nm. I dati così ottenuti vengono normalizzati rispetto al controllo ed utilizzati per costruire le curve dose-risposta.

STUDI IN VITRO DI ESPRESSIONE GENICA E PROTEICA

La BIO-MAD offre la possibilità di effettuare, attraverso metodi quantitativi e semi-quantitativi, la valutazione dell’espressione di geni e delle relative proteine tradotte in sistemi cellulari. Tale valutazione viene effettuata attraverso metodica di Polymerase Chain Reaction (PCR) e/o di Real-time PCR per l’espressione genica e di Western Blotting (WB), per l’espressione proteica. Tali metodiche vengono applicate non soltanto per la valutazione dell’espressione costitutiva di un gene o di una proteina in un determinato sistema cellulare, ma anche per determinare se l’esposizione acuta o cronica delle cellule ad una determinata sostanza determina una modificazione nell’espressione di proteine coinvolte nella regolazione dei processi fisiologici e fisiopatologici intracellulari.